Cell stock 만들기

*Stock은 나중에 비상 시(세포가 갑자기 나 죽을게~~ 시전 또는 박테리아가 원치 않았지만 들어와서 자리잡고 신나게 놀고 있는 현상을 포착했을 때, 또는 ‘누군가’의 압박에 의해 신속한 실험을 진행해야 할 때) 바로 꺼내서 안정화되고 나서부터(최소 12시간) 쓸 수 있게 된다. 따라서 cell stock은 최소 4개 최대 10개 정도 상태가 좋을 때 만들어 놓자.

1. 앞에서 culture하는 것처럼 T/E까지 치는 것은 동일하다.

2. 이후 cell을 complete media 3ml~5ml를 활용해 15ml conical tube로 옮겨준다. 이후 centrifugation으로 세포를 down 시킨다. 이때 기계가 돌아가고 있을 때, 미리 freezing media를 만들어준다. 이는 Cryobial 하나당 1ml로 complete media 900μl, DMSO(꼭 culture 용인지 확인 필요!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!) 100μl로 구성된다. 만들고 나서는 pipetting으로 잘 섞어준다. 또 이때 cryobial을 label 해준다(흰 바탕 상단부터 cell 이름, media이름, 본인 이름, 날짜를 써준다).

3. down 시킨 후 생긴 sup.은 suction으로 제거 후, 미리 준비한 freezing media 1ml로 풀어주고, 만약 여러 bial을 만들 예정이라면 남아있는 cell이 없는 freezing media로 cell이 있는 freezing media로 옮겨준다.

4. 이후 미리 label한 cryobial로 cell이 든 freezing media를 1ml씩 넣어준다.

*DMSO를 넣어주는 이유는 cell이 초저온(-80℃와 같은 deep freezer) 상태에서 cell이 갑자기 얼면서 생기는 결정에 의해 cell이 파괴되는 것을 막기 위함이다. 따라서 DMSO를 넣어 이러한 결정이 생기는 것을 막아준다.

*또 온도가 급격히 내려가는 것을 막기 위해서 상온과 동일한 isopropanol tank에 넣어주는데, 이는 비열이 높아서 분당 1℃씩 내려간다고 한다. 즉, 2시간 정도 있으면 상온에서 -80℃까지 내려간다. 따라서 급격히 cell이 어는 것을 방지하고 이를 통해 보다 건강한 상태로 cell을 얼릴 수 있다.