끄적끄적 연습장 끄적끄적 연습장

*Cell을 녹일 때는 세포를 최대한 빨리 녹이는 것이 중요하다. 이는 세포가 천천히 녹게 되면 원래 기존 세포 활동을 하는데 지장이 있고 또 세포가 파괴되기 때문이다. 이는 물의 특성 때문인데 -20℃에서 0℃ 사이에서 얼음 결정이 형성되기 때문이다. 이 온도 사이에서는 물이 얼고 얼음이 녹고 하는 것이 동시다발적으로 일어나기에 최대한 이 온도 범위를 벗어나게 하는 것이 중요하다. 그러므로 water bath에 cryotube를 담거서 얼음이 완전히 녹고 또 온도 자체가 37℃가 되도록 하는 것이 중요하다.1. Liquid nitrogen tank에서 cell stock을 꺼낸 후 water bath로 최대한 빨리 옮겨주고 녹인다.2. 완전히 녹고 따뜻하게 된 cell이 든 tube에 media 4ml..

*Stock은 나중에 비상 시(세포가 갑자기 나 죽을게~~ 시전 또는 박테리아가 원치 않았지만 들어와서 자리잡고 신나게 놀고 있는 현상을 포착했을 때, 또는 ‘누군가’의 압박에 의해 신속한 실험을 진행해야 할 때) 바로 꺼내서 안정화되고 나서부터(최소 12시간) 쓸 수 있게 된다. 따라서 cell stock은 최소 4개 최대 10개 정도 상태가 좋을 때 만들어 놓자.1. 앞에서 culture하는 것처럼 T/E까지 치는 것은 동일하다.2. 이후 cell을 complete media 3ml~5ml를 활용해 15ml conical tube로 옮겨준다. 이후 centrifugation으로 세포를 down 시킨다. 이때 기계가 돌아가고 있을 때, 미리 freezing media를 만들어준다. 이는 Cryobial..

*세포를 잘 키우려면 일단 아침 저녁으로 확인 후 이상이 있다면 그 즉시 대처하는 것에서부터 시작해야 한다.*매일마다 media를 교체해주는 것이 마냥 좋지만은 않다. 세포들이 자라면서 분비하는 signaling molecules(cytokine, chemokine)이 세포들이 자라는데 필요하기 때문이다. 따라서 media의 색이 변해간다 싶을 때 교체해주는 것이 좋다(media에는 phenol계 지시약들이 들어 있다. 그래서 불그스름한 색을 띈다. 또 앞서 언급한 것처럼 media에 다양한 단백질들이 섞이게 된다. Media 자체의 단백질과 FBS에 들어있던 것 등 외부 물질이 섞일 수도 있다. 그렇기에 PCR 시 높은 purity를 위해서, Westerblot 시 보다 깔끔한 band를 위해서 sam..