Cell Thawing

*Cell을 녹일 때는 세포를 최대한 빨리 녹이는 것이 중요하다. 이는 세포가 천천히 녹게 되면 원래 기존 세포 활동을 하는데 지장이 있고 또 세포가 파괴되기 때문이다. 이는 물의 특성 때문인데 -20℃에서 0℃ 사이에서 얼음 결정이 형성되기 때문이다. 이 온도 사이에서는 물이 얼고 얼음이 녹고 하는 것이 동시다발적으로 일어나기에 최대한 이 온도 범위를 벗어나게 하는 것이 중요하다. 그러므로 water bath에 cryotube를 담거서 얼음이 완전히 녹고 또 온도 자체가 37℃가 되도록 하는 것이 중요하다.

1. Liquid nitrogen tank에서 cell stock을 꺼낸 후 water bath로 최대한 빨리 옮겨주고 녹인다.

2. 완전히 녹고 따뜻하게 된 cell이 든 tube에 media 4ml가 들어있는 serologic pipette(pipette aid)로 흡입 후 총 5ml가 된 cell이 든 media를 15ml conical tube로 옮겨준다.

3. 이후 1000rpm/3min으로 centrifuge를 돌린다. 이때 미리 100Φ plate에 complete media 6ml를 뿌려 놓는다. 그러고 나서 pellet이 형성된 것을 확인 후 media를 suction한다. 이때 남는 media가 없게 tube를 기울여서 최대한 media를 suction한다.

4. pellet만 남은 tube에 media를 3ml 넣어서 pipetting을 통해 뭉친 cell을 풀어준다. 잘 풀어준 후에는 미리 complete media를 담아둔 100Φ plate에 cell을 풀어준다. 마지막으로는 plate를 상하 좌우로 잘 흔들어준다.

5. cell을 incubator에 넣기 전, 상태(cell이 쭈글하지는 않는지, 수는 적당한지 등을 확인)를 보고 넣어준다.